二苯胺法测定DNA的原理DNA分子中的脱氧核糖基在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮戊醛，与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物(λmax=595)。当DNA浓度为20 ~ 200μ g/ml时，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。向反应溶液中加入少量乙醛可以提高反应灵敏度。除了DNA，脱氧木糖和糖也有同样的反应。大多数其他糖，包括核糖，一般没有这种反应。标准曲线的绘制操作步骤按下表加入各种试剂，混匀，在60℃恒温水浴中保持45分钟，冷却后，在波长595nm处进行比色测定，以DNA浓度为轮段或横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。管号试剂012345标准DNA溶液/ml0.00.40.81.21.62.0蒸馏水/ml2.01.61.20.80.40二苯胺试剂/ml4.04.04.04.04.04.0A595nm 2试管用于测定595nm样品。然后准确加入4.0ml二苯胺试剂，混匀，在60℃恒温水浴中保温45分钟，冷却后，选择波长为595nm，在722分光光度计上进行比色法测定，根据所得吸光度对照标准曲线得出DNA的质量(μg)。DNA含量的计算根据测得的吸光值，root burner从标准曲线中找出吸光值对应的DNA含量，根据下式计算出样品中的DNA含量。W= m1/m2×100%其中W:W:DNA的质量分数(%)；M1:试样溶液中测得的DNA的质量(μg)；M2:试样溶液中所含试样的质量(μg)；试剂和设备。试剂1。DNA标准溶液(200μg/ml):小牛胸腺DNA钠盐用0.01mol/L氢氧化钠溶液配制成200μg/ml溶液。2.DNA样品溶液:准确称取干燥的DNA产物，用0.01mol/L氢氧化钠溶液配制成约100μg/ml的溶液。3.二苯胺试剂:称取1g纯二苯胺(如不纯，需在70%乙醇中重结晶两次)溶于100ml分析纯冰醋酸中，然后加入10ml高氯酸(A.R .，60%以上)，混匀备用。当所用药物纯净时，配制的试剂应无色。使用前加入1毫升1.6%的乙醛溶液(乙醛溶液要放在冰箱里保存，一周内可以使用)，保存在棕色瓶中。0.01摩尔/升氢氧化钠溶液5。冰醋酸。6.高氯酸。7.1.6%乙醛溶液。二、设备1。绘图纸拉武。2.吸管有0.20毫升、0.50毫升和1.0毫升。试管为1.5cm×15cm。4.722型分光光度计。5.见恒温水浴锅标准曲线。
用什么来识别DNA甲基绿或者二苯胺用甲基绿来识别DNA？DNA遇到甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
甲基绿是一种绿色微晶或亮绿色粉末，具有纤维培养和金属光泽。溶于水，蓝绿色。它是一种碱性染料，容易与聚合度高的DNA结合，呈绿色。
也被称为双绿SF。带金色光泽的绿色晶体，或浅绿色粉末。溶于水，蓝绿色。微溶于乙醇，不溶于乙醚和戊醇。
扩展数据:
甲基绿色操作注意事项:
1、操作人员应经过专门培训，严格遵守操作规程。
2.操作和处理应在局部通风或整个厨房表面有通风设施的地方进行。
3.避免眼睛和皮肤接触，避免吸入蒸汽。
4.远离火种和热源，工作场所严禁吸烟。
5.使用防爆通风系统和设备。
6.如果需要装罐，应控制流量，并提供接地装置，防止静电积聚。
7.避免接触禁用化合物，如氧化剂。
8.搬运时轻拿轻放，防止包装和容器受损。
9.有害物质可能残留在倒置的空容器中。
10.使用后洗手，不要在工作场所吃东西或喝水。
11、配备相应品种和数量的消防器材和泄漏应急处理设备。
参考来源:百度百科-甲基绿
参考来源:百度百科-DNA
二苯胺与DNA反应的本质:DNA在酸性条件下加热，其嘌呤碱基与脱氧核糖之间的糖苷键断裂，生成嘌呤碱基、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸，而2-脱氧核糖在酸性环境下加热脱水生成ω-羟基-γ-酮戊醛，与二苯胺试剂反应生成蓝色物质。
在二苯胺的乙醇溶液中加入9倍体积的浓硫酸(形成强酸溶液)制备二苯胺试剂。这种试剂遇硝酸盐或硝酸产生蓝色苯胺蓝沉淀，可用来鉴别硝酸盐。
扩展数据:
二苯胺试剂:
溶液A:将1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，然后加入1.5ml浓硫酸，贮存于棕色瓶中(遇光分解)。如果冰醋酸是结晶状态，使用前需要加热融化。
溶液B: 0.2%乙醛溶液(CH3CHO)。
制备:在10mlA溶液中加入0.1mlB溶液，煮沸观察显色。
合成方法:
1.苯胺盐酸盐法:由苯胺和苯胺盐酸盐缩合而成。
2.三氯化铝催化法:以苯胺为原料，氯化铝为催化剂，经缩合反应得到。
3.苯酚缩合法:由苯酚和苯胺在HD92催化剂作用下缩合而得。
4.苯胺用无水三氯化铝作催化剂进行缩合。反应产物用盐酸分离，用氢氧化钠中和，中和后煮沸洗涤，用true 空蒸馏，用乙醇结晶，分离得到成品。
5.工业二苯胺是通过精制制备的。
6.工业二苯胺用氰化钾在纯棚中洗涤，与铁等金属络合后与二苯胺分离。
7.在氮气流中减压蒸馏二苯胺得到成品。
参考来源:百度百科-二苯胺
二苯胺试剂在dna鉴定中之所以错误，是基于二苯胺能与缺失的核苷酸形成磷酸胺，与DNA中不成对的碱基形成特定的化学染色反应，显色程度与不成对的碱基数量成正比的原理。因此，二苯胺试剂的检测结论受到试剂质量、反应条件、DNA质量、储存条件等多种因素的影响。此外，DNA样本可能含有各种杂质，如酶和盐，这些杂质可能会干扰试剂的正常反应，导致检测结果不准确。因此，使用二苯胺试剂鉴定DNA时，要注意环境和条件，同时要保证DNA样本的纯度和完整性。
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